Tạo dòng, biểu hiện kháng nguyên F18 dung hợp peptide định hướng tế bào M

( 0 đánh giá )
Miễn phí

Dựa trên cấu trúc của Hsp60 và tin sinh học, peptide PEP được dự đoán có khả năng tương tác với thụ thể PrPC. Vector pET22b-pep-f18 được cấu trúc bằng cách thế gene gfp trong vector pET22b-pep-gfp bằng gene f18. Sau khi xử lí với cặp enzyme cắt hạn chế XhoI và BamHI, gene f18 và vector pET22b-pep-gfp được nối với nhau bằng T4 DNA Ligase. Vector pET22b-pep-f18 được hóa biến nạp vào chủng vi khuẩn E. coli BL21(DE3), cảm ứng biểu hiện với IPTG 0,5 mM. Sự biểu hiện của protein PEP-GFP được kiểm tra bằng điện di SDS-PAGE, nhuộm Coomassie Blue và Western blot với kháng thể kháng 6xHis. Cuối cùng, protein PEP-F18 được tinh sạch bằng sắc ký ái lực ion kim loại (IMAC). Kết quả cho thấy vector pET22b-pep-f18 đã được tạo thành công. Protein PEP-F18 được thu nhận, tinh sạch với độ tinh sạch cao. Đây là nguồn nguyên liệu quan trọng cho các thử nghiệm miễn dịch sau này.