Phát hiện virus gây bệnh rụng vảy ở cá vược châu Á bằng kỹ thuật LAMP màu với chỉ thị xylenol orange

( 0 đánh giá )
Miễn phí

SDDV là virus DNA thuộc chi Megalocytivirus, gây tử vong 40–50% ở cá giống và cá trưởng thành, ảnh hưởng lớn đến ngành nuôi cá vược ở Đông Nam Á  

Phương pháp PCR hiện tại tuy nhạy nhưng đòi hỏi thiết bị và nhân lực chuyên môn, không phù hợp với điều kiện thực địa  

LAMP-XO sử dụng chất chỉ thị pH XO, chuyển màu từ tím sang vàng khi pH giảm do sản phẩm khuếch đại DNA  

Tối ưu hóa nhiệt độ phản ứng ở 65 ℃ và nồng độ XO 0.12 mM cho kết quả rõ nhất giữa mẫu dương và âm  

Độ nhạy: phát hiện được 100 pg DNA tổng hoặc 10² bản sao plasmid, nhạy hơn semi-nested PCR (1 ng hoặc 10³ bản sao)  

Không phản ứng chéo với 14 mầm bệnh khác như Streptococcus spp., Vibrio spp., ISKNV, NNV, Aeromonas, Flavobacterium…  

Phương pháp trích DNA nhanh G3T (5 phút) cho kết quả tương đương với phương pháp phenol/chloroform truyền thống  

LAMP-XO phát hiện chính xác 33/36 mẫu cá nhiễm SDDV, trong đó có 7 mẫu âm tính với PCR nhưng dương tính với LAMP  

Thời gian hoàn tất toàn bộ quy trình (trích DNA + khuếch đại + đọc kết quả) dưới 65 phút, phù hợp với ứng dụng tại trại nuôi  

Phương pháp có thể mở rộng để phát hiện các mầm bệnh khác bằng thiết kế mồi phù hợp