Lipase được tinh sạch bằng trao đổi ion và loại bỏ cation, xác nhận bằng SDS-PAGE và MALDI-MS.

• MBCD đóng vai trò bảo vệ cấu trúc enzyme trong quá trình đông khô, giúp hình thành hạt nano qua phân tách pha.
• - Tỷ lệ lipase:MBCD tối ưu là 1:4 (w/w), cho hạt nano nhỏ nhất (~75 nm) và hoạt tính cao nhất (gấp 48 lần enzyme thô).
• - Phân tích FTIR vùng amide I cho thấy hạt nano có tỷ lệ α-helix cao hơn (32.76%) và β-sheet thấp hơn (34.41%) so với enzyme đông khô.
• - Hoạt tính enzyme trong môi trường hữu cơ được cải thiện nhờ cấu trúc ổn định và giảm cản trở khuếch tán cơ chất.
• - Tối ưu hóa lượng nước ban đầu cho phản ứng transester hóa: 1% nước (theo khối lượng dầu) là tối ưu, cao hơn gây giảm hiệu suất.
• - Phản ứng transester hóa olive oil với methanol đạt 98% FAME sau 10 giờ với hạt nano lipase, so với 64% (enzyme thô) và 70% (enzyme đông khô) sau 18 giờ.
• - So sánh với các nghiên cứu trước: lipase Rhizopus oryzae cần >45 giờ để đạt 80–90% FAME, hoặc 70 giờ để đạt 90% trong môi trường nước.
• - Hạt nano lipase có thể tái sử dụng 5 lần, hiệu suất FAME vẫn >81%, trong khi enzyme thô và đông khô giảm mạnh sau 2–3 lần.
• - Phân tích GC-MS xác nhận thành phần FAME chủ yếu là methyl oleate, methyl palmitate, phù hợp tiêu chuẩn biodiesel.
• - Phản ứng cũng được thử nghiệm với ethanol, cho thấy ethanol ít gây bất hoạt enzyme hơn methanol ở nồng độ cao.