Tạo dòng tế bào kháng virus GCRV hiệu quả bằng cách loại bỏ JAM-A ở cá trắm cỏ bằng CRISPR/Cas9

( 0 đánh giá )
Miễn phí

GCRV là virus gây bệnh xuất huyết nghiêm trọng ở cá trắm cỏ, gồm 3 genotype: GCRV-I, GCRV-II và GCRV-III  

JAM-A là protein thuộc họ immunoglobulin, được dự đoán là thụ thể của GCRV, tương tự như ở virus reovirus có vỏ ngoài  

CRISPR/Cas9 được sử dụng để loại bỏ exon 6 của gen gcJAM-A trong tế bào CIK, tạo dòng tế bào gcJAM-A-KO  

Tế bào gcJAM-A-KO có biểu hiện JAM-A bị mất hoàn toàn, xác nhận bằng T7E1 assay, Western blot và giải trình tự  

Sau khi gây nhiễm GCRV-JX0901 (genotype I) và HGDRV (genotype III), tế bào gcJAM-A-KO có hiệu quả kháng virus rõ rệt  

Hiệu quả kháng thể hiện qua giảm CPE, giảm tải lượng virus (giảm >10⁴ TCID₅₀/ml), giảm biểu hiện mRNA và protein virus  

Tế bào GSM (cơ của kỳ giông khổng lồ Trung Quốc) không cảm nhiễm GCRV, nhưng khi biểu hiện JAM-A thì trở nên cảm nhiễm  

GSM biểu hiện JAM-A cho phép GCRV xâm nhập, nhân lên và gây CPE, xác nhận vai trò thiết yếu của JAM-A trong nhiễm virus  

JAM-A có thể là mục tiêu tiềm năng để phát triển liệu pháp kháng virus hoặc chọn giống kháng bệnh ở cá trắm cỏ  

Nghiên cứu này là ứng dụng đầu tiên của CRISPR/Cas9 để kháng virus ở động vật thủy sản, mở ra hướng mới cho phòng bệnh