Lá trầu không được thu hái tại Yên Mỹ – Hưng Yên, sơ chế và nghiền thành bột mịn. Chiết xuất bằng phương pháp ngâm lạnh trong 72 giờ, cô quay chân không để thu cao khô. Vi khuẩn Aeromonas spp. và Streptococcus agalactiae được phân lập từ cá rô phi bệnh tại Hải Dương. Thử nghiệm kháng khuẩn in vitro thực hiện bằng phương pháp khuếch tán trên thạch Kirby-Bauer, sử dụng dịch chiết ở nồng độ 100 mg/ml. Kết quả cho thấy tất cả các loại dịch chiết đều có khả năng ức chế vi khuẩn, nhưng cao khô từ ethanol 96% cho hiệu quả cao nhất. Thử nghiệm pha loãng cho thấy nồng độ tối thiểu còn hiệu quả là 0,39 mg/ml với Aeromonas spp. và 0,78 mg/ml với Streptococcus agalactiae. So sánh với các nghiên cứu trước, cao khô dịch chiết lá trầu không trong nghiên cứu này có hiệu quả kháng khuẩn vượt trội. Kết quả khẳng định tiềm năng ứng dụng của Piper betle trong phòng trị bệnh vi khuẩn trên cá rô phi.