Nền tảng: đồng biểu hiện P1 và protease 3CD của từng phân týp dưới promoter polh (P1) và CMV (3CD) trong baculovirus flashBAC GOLD™, nuôi cấy ở tế bào High Five™.

• Tối ưu hóa: chọn dòng virus đơn bằng pha loãng giới hạn, điều chỉnh mật độ tế bào và MOI để tăng năng suất C4 và CV-A16.
• - Năng suất VLP ngoại bào (mg/L): C2 = 195; C4 = 85; B5 = 157; CV-A16 = 173.
• - Tinh sạch: lọc TFF, sắc ký hydroxyapatite, sắc ký lọc gel Sephacryl S-400 HR; VLP thu được có hình cầu icosahedral rỗng ~30 nm, chứa VP0, VP1, VP3.
• - Thử nghiệm miễn dịch ở chuột BALB/c:
•     + Vắc xin đơn giá C4 VLP tạo IgG và kháng thể trung hòa chéo với EV-A71 C2, C4, B5; không bảo vệ CV-A16.
•     + Vắc xin đơn giá CV-A16 VLP tạo đáp ứng đặc hiệu CV-A16; không trung hòa EV-A71.
•     + Vắc xin nhị giá (C4 + CV-A16) tạo đáp ứng dịch thể và tế bào với cả EV-A71 và CV-A16, không có hiện tượng can nhiễu miễn dịch.
• - ELISPOT: cả đơn giá và nhị giá đều kích thích đáp ứng tế bào T đặc hiệu với nhiều phân týp.
• - Ý nghĩa: nền tảng cho phép sản xuất nhanh VLP của các chủng lưu hành mới (ví dụ CV-A6, CV-A10) để phát triển vắc xin đa giá HFMD.