RGNNV gây bệnh thần kinh và võng mạc ở nhiều loài cá biển nuôi. Protein capsid RGNNV-CP được tối ưu hóa mã hóa theo codon của Y. lipolytica và biểu hiện dưới dạng toàn bộ hoặc cắt N-terminal.

Các vector biểu hiện dựa trên trình tự ARS và vùng rDNA 26S được thiết kế để tăng số bản sao gen RGNNV-CP trong tế bào. Vector tích hợp sử dụng các biến thể của gen URA3 với promoter bị cắt ngắn (0–41 bp) cho phép tích hợp đa bản sao vào vùng lặp rDNA.

Protein RGNNV-CP được phát hiện dưới dạng monomer (~37 kDa) và trimer (~120 kDa), là đơn vị cơ bản của cấu trúc VLPs. Phân tích bằng ly tâm gradient sucrose và kính hiển vi điện tử cho thấy sự hình thành các hạt cầu đường kính 10–30 nm giống VLPs.

Thí nghiệm miễn dịch bằng cách cho chuột uống tế bào Y. lipolytica tái tổ hợp cho thấy tạo kháng thể IgG đặc hiệu chống RGNNV-CP, tương đương với chủng S. cerevisiae, dù mức biểu hiện thấp hơn.

Biểu hiện RGNNV-CP tăng rõ khi sử dụng vector tích hợp đa bản sao, đặc biệt với promoter URA3 bị cắt 15 bp, đạt 8 bản sao/genome. Chủng Polf/ura3d15-15 cho mức biểu hiện cao nhất, gấp đôi chủng mang 2 vector ARS.

Kết luận: Y. lipolytica là hệ thống biểu hiện tiềm năng để sản xuất VLPs RGNNV-CP, có thể dùng làm vaccine uống cho cá. Ngoài ra, sinh khối Y. lipolytica còn có thể cung cấp protein đơn bào và dầu đơn bào giàu EPA, hỗ trợ dinh dưỡng trong nuôi cá biển.