Biofilm hình thành rõ rệt ở nồng độ 4.5 mM Ca²⁺, trong khi không có biofilm ở môi trường không bổ sung canxi. Có 441 gene biểu hiện khác biệt giữa planktonic và biofilm, nhiều gene liên quan đến stress oxy hóa, hấp thu sắt, tiết protein ngoại bào và chuyển hóa hô hấp. Biofilm làm giảm biểu hiện gene hô hấp hiếu khí, đồng thời tăng các enzyme chống oxy hóa như catalase và AhpC. Canxi kích hoạt hệ thống tiết protein T9SS và tăng biểu hiện gene siderophore giúp hấp thu sắt. Các gene liên quan đến vận động trượt bị ức chế trong biofilm. Kết luận: canxi đóng vai trò tín hiệu điều hòa sinh lý biofilm và tăng độc lực của F. columnare, mở ra hướng nghiên cứu về kiểm soát bệnh lý trong nuôi cá nước ngọt.