Bối cảnh:

  + Melioidosis do B. pseudomallei gây ra, tỷ lệ tử vong cao, chưa có vắc-xin.

  + Chẩn đoán nuôi cấy mất thời gian, độ nhạy thấp; ELISA với kháng nguyên tái tổ hợp cải thiện nhưng cần BSL-3 nếu dùng kháng nguyên từ B. pseudomallei.

  + B. thailandensis gần gũi về di truyền và miễn dịch, không gây bệnh, có thể sản xuất kháng nguyên an toàn hơn.

• Mục tiêu:
•   + Tạo và tinh sạch FLAG300 và OmpABT từ B. thailandensis.
•   + Đánh giá hiệu quả ELISA gián tiếp phát hiện kháng thể kháng melioidosis.
• - Phương pháp:
•   + Tách gen ompA và đoạn flagellin từ B. thailandensis E264, chèn vào vector pET24a(+), biểu hiện ở E. coli BL21(DE3).
•   + Tinh sạch protein bằng sắc ký ái lực kim loại (IMAC) trong điều kiện biến tính.
•   + ELISA gián tiếp: phủ đĩa bằng FLAG300 (1 µg/ml) hoặc OmpABT (0,1 µg/ml), huyết thanh pha loãng 1:3200, phát hiện bằng anti-IgG-HRP.
•   + Mẫu: 42 huyết thanh melioidosis xác nhận nuôi cấy, 74 huyết thanh nhiễm khuẩn khác, 167 huyết thanh người khỏe.
•   + Ngưỡng dương tính: trung bình OD nhóm chứng khỏe + 2 SD.
• - Kết quả:
•   + FLAG300: nhạy 90,48% (38/42), đặc hiệu 87,14% (210/241), chính xác 87,63%.
•   + OmpABT: nhạy 80,95% (34/42), đặc hiệu 89,21% (215/241), chính xác 87,99%.
•   + Kết hợp hai kháng nguyên: nhạy 85,71%, đặc hiệu 92,95%, chính xác 91,87%.
•   + OD nhóm bệnh cao hơn rõ rệt so với nhóm chứng.
• - Thảo luận:
•   + FLAG300 và OmpABT từ B. thailandensis phản ứng chéo với kháng thể kháng B. pseudomallei, cho hiệu quả chẩn đoán tốt.
•   + Kết hợp kháng nguyên cải thiện đặc hiệu, giảm dương tính giả.
•   + Ưu điểm: sản xuất an toàn hơn, không cần BSL-3.
•   + Có thể xem xét làm ứng viên vắc-xin.
• - Kết luận:
•   + Kháng nguyên từ B. thailandensis có thể dùng trong ELISA chẩn đoán melioidosis, an toàn và hiệu quả.
•   + Kết hợp FLAG300 và OmpABT tối ưu hóa độ đặc hiệu và duy trì độ nhạy cao.