Enzyme được đồng bất hoạt trên silica epoxy bằng phương pháp nhẹ, thời gian 6 giờ, lượng enzyme từ 4–15 mg/g giá thể.

• Tỷ lệ CALB:RML ảnh hưởng đến độ ổn định nhiệt và khả năng chịu methanol của hệ enzyme.
• - Enzyme đồng bất hoạt có độ ổn định cao hơn enzyme đơn lẻ, giữ >60% hoạt tính ở 50–70 °C và trong 70% methanol.
• - Phản ứng transester hóa thực hiện ở 30–50 °C, tỷ lệ mol methanol/dầu từ 1:1 đến 9:1, thời gian 12–36 giờ, t-butanol từ 0–40%, tỷ lệ CALB:RML từ 0.5:1 đến 2.5:1.
• - Thiết kế thí nghiệm CCD gồm 50 thí nghiệm: 33 điểm chính, 9 điểm trục và 8 điểm trung tâm.
• - Mô hình hồi quy bậc hai được xây dựng với R² = 0.89, R² hiệu chỉnh = 0.81, R² dự đoán = 0.63, độ phù hợp cao.
• - Các biến ảnh hưởng mạnh nhất đến hiệu suất FAME: tỷ lệ methanol/dầu, thời gian phản ứng, nồng độ t-butanol và tỷ lệ enzyme.
• - Tối ưu hóa cho thấy tỷ lệ CALB:RML = 2.5:1, t-butanol 39.9%, methanol/dầu 5.9, nhiệt độ 35.6 °C, thời gian 33.5 giờ → FAME đạt 78.3%.
• - Mô hình được xác nhận bằng thí nghiệm thực tế, sai số nhỏ giữa giá trị dự đoán và thực nghiệm.