Đánh giá phương pháp PCR lưỡng mục tiêu dựa trên gen fimC và bdha để nhận diện và phân biệt Burkholderia pseudomallei với các loài Burkholderia gần giống

( 0 đánh giá )
Miễn phí

Gen fimC được xác định là đặc hiệu cho B. pseudomallei thông qua phân tích in silico và được sử dụng làm mục tiêu nhận diện loài. Gen bdha đã được nhóm nghiên cứu sử dụng trước đó để phân biệt các loài Burkholderia thông qua giải trình tự. Phương pháp PCR lưỡng mục tiêu được thiết kế gồm ba thành phần: cặp mồi fimC, cặp mồi bdha và kiểm soát nội bộ (IAC) sử dụng đoạn gen từ plasmid pUC19. Độ đặc hiệu đạt 100% khi thử nghiệm với 38 chủng vi khuẩn, bao gồm các chủng Burkholderia và các loài gần giống như Pseudomonas, Stenotrophomonas, Achromobacter. Độ nhạy đạt 10 pg DNA tinh sạch hoặc 3 × 10³ CFU/mL khi thử nghiệm với mẫu nước tiểu người được cấy B. pseudomallei. Phương pháp được kiểm chứng trên mô hình chuột BALB/c nhiễm B. pseudomallei, cho kết quả chính xác ở cả mức chi và mức loài. PCR lưỡng mục tiêu giúp rút ngắn thời gian chẩn đoán, giảm nguy cơ phơi nhiễm trong phòng thí nghiệm và có thể ứng dụng trong giám sát môi trường hoặc chẩn đoán lâm sàng.