Đặc tính phân tử của hai chủng Aureobasidium pullulans L1 và L8 kiểm soát sinh học sau thu hoạch

( 0 đánh giá )
Miễn phí

Hai chủng L1 và L8 được phân lập từ bề mặt quả đào Redhaven tại vườn thực nghiệm Đại học Bologna, Ý. Cả hai chủng đều được xác định là A. pullulans thông qua quan sát hình thái và giải trình tự vùng ITS và D1/D2 của rDNA. Để đánh giá hiệu quả kiểm soát sinh học, nhóm nghiên cứu đã xử lý vết thương trên quả đào bằng 20 µL dịch nấm men (10⁸ tế bào/mL), sau đó cấy 20 µL dịch bào tử M. laxa (10⁵ bào tử/mL). Sau 6 ngày ở 20 ℃, chủng L1 giảm tỷ lệ nhiễm bệnh đến 95%, L8 giảm 80%, trong khi các chủng khác dao động từ 60–70%, một số thậm chí làm tăng tỷ lệ nhiễm bệnh.

 

Để phát triển công cụ định danh phân tử, nhóm nghiên cứu sử dụng kỹ thuật RAPD với 4 mồi ngẫu nhiên, phát hiện đoạn DNA đặc hiệu 984 bp chỉ có ở L1 và L8. Đoạn này được giải trình tự và xác định là retroelement thuộc họ retrotranscriptase. Từ đó, họ thiết kế 3 cặp mồi SCAR, trong đó cặp SCAR 3f/3r khuếch đại đoạn 137 bp đặc hiệu cho L1 và L8. PCR với cặp mồi này không khuếch đại ở bất kỳ chủng A. pullulans nào khác trong bộ sưu tập 40 chủng.

 

Để xác định giới hạn phát hiện (LOD), nhóm nghiên cứu sử dụng digital PCR với cặp mồi khuếch đại gen đơn bản a-phosphoglucose mutase. Kết quả cho thấy có thể phát hiện chính xác 43 tế bào L1 và 215 tế bào L8. Điều này cho phép theo dõi chính xác sự hiện diện của hai chủng trong môi trường tự nhiên, phục vụ cho việc phát triển chế phẩm sinh học thương mại.