Cơ sở: EV71 kích hoạt quá mức ERK1/2 trong tế bào chủ; ức chế MEK1 có thể cản trở nhân lên virus.

• Thiết kế: thay nối đôi C3–C4 của khung coumarin G8935 bằng liên kết amide tạo vòng benzoxazine-2,4-dione; biến đổi nhóm thế trên vòng benzyl và benzoxazine.
• - Sàng lọc HTRF BRaf/MEK1: 9f (F ở R3 + nhóm –NHSO₂CH₃ ở R4) có IC₅₀ ≈ 0,30 µM; thay đổi nhóm thế R4 và R1 cho thấy dimethylcarbamoyloxy ở R1 và nhóm sulfonylamino mạch ngắn ở R4 là tối ưu.
• - 9k (–NHSO₂NHCH₃) và 9m (–NHSO₂NHCH₂CH₂CN) đạt IC₅₀ 55–60 nM, không ức chế MEK1 đã phosphoryl hóa, không cạnh tranh ATP → ức chế allosteric MEK1 chưa phosphoryl hóa.
• - Mô phỏng động học phân tử: 9k tạo liên kết hydro với Val211, Ser212, Asn221; gây dịch chuyển Ser222 (vị trí phosphoryl hóa bởi Raf), ổn định dạng bất hoạt.
• - Thử nghiệm tế bào RD: CC₅₀ >100 µM; EC₅₀ 9k = 1,02 µM, 9m = 3,92 µM; chỉ số điều trị >25–98; ức chế p-MEK, p-ERK và giảm mạnh VP1 theo liều.
• - So với PD0325901, U0126: 9k, 9m ức chế phosphoryl hóa MEK và nhân lên EV71 hiệu quả hơn, tiềm năng kháng virus với cửa sổ an toàn lớn.